Sequel della pellicola del 2006. Sono trascorsi due anni da quando Larry Daley è "sopravvissuto" alla sua folle notte da guardiano e ora il nostro eroe è un uomo di successo, a capo di un'azienda che produce le sue invenzioni. Un giorno, colto dalla malinconia, Larry torna al Museo di Storia Naturale e scopre che dovrà rimanere chiuso per qualche tempo per ristrutturazioni. Quasi tutti i pezzi delle collezioni verranno, quindi, temporaneamente spostati all'Istituto Smithsonian di Washington. Fortunatamente la tavola d'oro del faraone Akmen-ra rimarrà al suo posto. O, almeno, così dovrebbe essere... Cast, come da copione, ricco di camei: da Owen Wilson a Robin Williams, da Amy Adams a Hank Azaria, da Steve Coogan a Patrick Gallagher.